健康咨詢(xún)描述: 轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定中,為什么要用測(cè)定管吸光度減去對(duì)照管吸光度才能得出酶的活力
你好!應(yīng)該是空白管而不是對(duì)照管吧,在用手工方法測(cè)量酶活性時(shí)應(yīng)該是用測(cè)定管的吸光度減去空白管的吸光度再剩以標(biāo)準(zhǔn)值,因?yàn)橛行┰噭┍旧碛械咨?所以測(cè)定吸光度的時(shí)候得把試劑原有的底色去掉才能更接近測(cè)定物質(zhì)的真值.
你好,應(yīng)該是空白管而不是對(duì)照管吧,在用手工方法測(cè)量酶活性時(shí)應(yīng)該是用測(cè)定管的吸光度減去空白管的吸光度再剩以標(biāo)準(zhǔn)值,因?yàn)橛行┰噭┍旧碛械咨?所以測(cè)定吸光度的時(shí)候得把試劑原有的底色去掉才能更接近測(cè)定物質(zhì)的真值.
您好!在氨基酸的分解代謝過(guò)程中,聯(lián)合脫氨基地大多數(shù)氨基酸的主要代謝方式,通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用與氧化脫氨基的作用偶聯(lián)而完成.本實(shí)驗(yàn)以丙氨酸和a-酮戊二酸作為谷丙轉(zhuǎn)氨酶的作用的底物,利用內(nèi)源性磷酸吡哆醛作為輔酶,在一定條件及時(shí)間作用后來(lái)測(cè)定所生成的丙酮酸的含量來(lái)確定其酶的活力.丙酮酸能與2,4二硝基苯肼結(jié)合,生成丙酮酸-2,4二硝基苯腙,后者在堿性條件溶液中呈棕色,基吸收光譜的峰為439-530nm,可用于測(cè)定丙酮酸的含量.
a-酮戊二酸與能與2,4二硝基苯肼結(jié)合,生成相應(yīng)的苯腙,但后者在堿性溶液中的吸收光譜與丙酮酸二硝基苯肼稍有差別,在520nm波長(zhǎng)處a-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度遠(yuǎn)比丙酮酸2,4二硝基苯腙為低,因此在520nm處吸光度增加的程度與反應(yīng)體系中的丙酮酸和a-酮戊二酸的摩爾比基本上呈線(xiàn)性關(guān)系.故可籍此可測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力.
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